1. 研究目的与意义
黄蜀葵为锦葵科秋葵属植物黄蜀葵Abelmoschus manihot (L.) Medic.的干燥花冠，主治小便淋及催生，为企业独家药品黄葵胶囊的原料药材，在临床上主要用于治疗慢性肾炎、肾病综合征等，临床使用量大，常常供不应求，具有良好的经济效益和发展前景。但黄蜀葵存在严重的连作障碍现象，导致黄蜀葵植株矮小、易大面积发病枯萎死亡、花蕾数量少、花冠直径小、留存种子质量差等，药材产量与质量急剧下降，严重影响和制约了一线的药品生产。连作障碍的原因有土壤营养成分的改变、土传病害加重、土壤理化性质的改变、土壤酶活性和作物自毒作用等。在微生态变化的角度上研究，发现根系分泌物和土壤微生物的相互作用是连作障碍发生的重要原因之一。前期研究发现，镰刀菌属真菌是黄蜀葵茎枯病的主要致病菌，发病率高，极易传染。本课题通过研究黄蜀葵根际土壤中不同化学部位对镰刀属真菌活性的影响，明确根际土壤中植物分泌的活性化学部位，从微生态角度入手探寻黄蜀葵发生连作障碍的原因。
研究内容：
1、收集黄蜀葵根际土壤（健康地、染病地）中不同极性溶剂浸提液；
2. 文献综述
黄蜀葵活性成分及分离方法研究进展
摘要：黄蜀葵花已分离的化学成分主要有黄酮类、有机酸类、鞣酸类及长链烃类等化合物。黄蜀葵的根、茎、叶中的主要化学成分为多糖类物质, 黄蜀葵种子化学成分、营养成分、矿质元素的分析和研究较为全面。黄蜀葵种子含18种氨基酸，必需氨基酸含量较为丰富，此外，黄蜀葵种子含24种矿质元素。黄蜀葵活性化学成分常用的分离方法分别有采用甲醇、乙醇加热回流提取，超声提取，索氏提取等方法对黄蜀葵花中黄酮类化合物进行提取，并同时采用正交分析法优选出提取最佳工艺；采用比色法测总黄酮化合物含量，用色谱和分布结晶的方法进行成分的分离，从而得到黄酮类单体成分；挥发性成分采用水蒸气蒸馏的方法提取；黄蜀葵根中多糖成分的提取方法先采用蒸馏水浸提法，再采用醇提法，最后利用重结晶浓缩多糖的精制品；黄蜀葵茎多糖的提取分离纯化方法与根相同。
3. 设计方案和技术路线
研究方案：
1. 黄蜀葵根际土壤活性成分的提取：分别选用溶剂石油醚、氯仿、乙酸乙酯、乙醇、水按照极性小到大的顺序依次提取；
2. 真菌的培养：把不同的提取液添加到培养基中作为实验组，不添加的最为空白对照组；
3. 活性部位的筛选：通过观察培养基中镰刀菌属真菌的生长状况，分别筛选出对镰刀菌属真菌有促进和抑制作用的黄蜀葵活性部位；
鉴定：对鉴定有效活性部位.技术路线：
染病地根际土壤 |
健康地根际土壤 |
不同极性的溶剂对活性成分的提取
真菌培养 |
水液 |
乙醇液 |
乙酸乙酯液液 |
氯仿液 |
石油醚 |
筛选
促进真菌生长的化学部位 |
抑制真菌生长的化学部位 |
活性化学部位鉴定 |
4. 工作计划
2022.1-2022.3：相关文献的查阅、整理；
2022.3-2022.4：采集黄蜀葵健康地、染病地根际土壤；收集浸提液；
2022.4-2022.5：浸提液培养真菌；
5. 难点与创新点
特色与创新：黄蜀葵无野生药用资源，原料生产依赖人工栽培，存在明显的连作障碍现象。
土壤微生物在耕种土壤中广泛存在，种类繁多，是连作作物发生连作障碍的主要因子之一，研究起步早，研究基础厚实。
本项目选择从土壤微生物的角度探讨黄蜀葵连作障碍的发生机理，较已有的化学成分研究方法，是一种新的研究思路，为本项目的特色和创新之处。
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