1. 本选题研究的目的及意义
近年来，新发病毒性传染病频繁爆发，对人类健康和社会稳定构成严重威胁。
其中，很多病毒感染难以预防和治疗，因此，深入研究病毒与宿主相互作用机制、开发新的抗病毒药物和治疗策略具有重要意义。
双链RNA依赖性蛋白激酶（double-strandedRNA-dependentproteinkinase，PKR）是宿主细胞中一种重要的抗病毒蛋白，能够被病毒RNA激活并磷酸化真核起始因子2α（eIF2α），从而抑制病毒蛋白合成，发挥广谱抗病毒作用。
2. 本选题国内外研究状况综述
#PKR与病毒感染PKR作为一种重要的抗病毒蛋白，其功能和作用机制一直是国内外研究的热点。
##国内研究现状国内学者在PKR抗病毒机制研究方面取得了一系列进展。
例如，李刚等[1]研究发现，PKR能够抑制寨卡病毒复制，并揭示了其潜在的分子机制。
3. 本选题研究的主要内容及写作提纲
#主要内容本研究将利用CRISPR-Cas9基因编辑技术对细胞系进行基因编辑，敲除PKR基因，并对敲除后的细胞系进行鉴定。
1.设计并构建针对PKR基因的CRISPR-Cas9载体；2.将CRISPR-Cas9载体转染至目标细胞系；3.对转染后的细胞进行筛选，获得PKR基因敲除的细胞克隆；4.利用PCR、测序等技术对PKR基因敲除细胞系进行鉴定；5.利用WesternBlot等技术检测PKR蛋白表达水平，进一步验证基因敲除效果；6.对PKR基因敲除细胞系的生物学特性进行初步研究，例如细胞生长曲线、病毒复制能力等。
#写作提纲
第1章绪论
1.1CRISPR-Cas9技术概述
1.2抗病毒蛋白PKR的功能与机制
1.3PKR基因敲除细胞系的研究意义
1.4本研究的目的和意义
第2章材料与方法
2.1实验材料
2.2CRISPR-Cas9载体构建
2.3细胞转染与筛选
2.4PKR基因敲除细胞系的鉴定
2.5脱靶效应分析
第3章结果
3.1CRISPR-Cas9载体构建及鉴定
3.2PKR基因敲除细胞系的筛选
3.3PKR基因敲除效率的测定
3.4脱靶效应分析结果
第4章讨论
4.1CRISPR-Cas9技术构建PKR基因敲除细胞系的效率
4.2PKR基因敲除对细胞表型的影响
4.3PKR基因敲除细胞系的应用前景
4.4本研究的不足与展望
第5章结论
5.1成功构建了PKR基因敲除细胞系
5.2PKR基因敲除效率达到预期
5.3本研究为相关病毒研究提供了新的细胞模型
第6章展望
6.1利用该细胞系进行病毒复制机制研究
6.2筛选新的抗病毒药物靶点
6.3探索PKR基因与其他基因的相互作用
4. 研究的方法与步骤
本研究将采用以下方法与步骤：
1.细胞培养:选择合适的细胞系进行培养，例如HEK293T细胞、HeLa细胞等。
2.sgRNA设计与合成:根据PKR基因序列设计并合成针对PKR基因的特异性sgRNA，并克隆至CRISPR-Cas9表达载体。
3.细胞转染:将构建好的CRISPR-Cas9表达载体转染至目标细胞系，利用抗生素筛选获得稳定表达Cas9蛋白和sgRNA的细胞系。
5. 研究的创新点
本研究拟利用CRISPR-Cas9技术构建PKR基因敲除细胞系，与传统RNAi技术相比，CRISPR-Cas9技术具有更高的基因敲除效率和更低的脱靶效应，能够更精准地研究PKR基因的功能。
此外，本研究还将对PKR基因敲除细胞系进行病毒感染实验，探究PKR基因敲除对病毒复制的影响，为深入研究PKR抗病毒机制提供新的思路。
6. 计划与进度安排
第一阶段 （2024.12~2024.1）确认选题，了解毕业论文的相关步骤。
第二阶段（2024.1~2024.2）查询阅读相关文献，列出提纲
第三阶段（2024.2~2024.3）查询资料，学习相关论文
7. 参考文献（20个中文5个英文）
1. 刘晓敏, 张晓燕, 张永亮, 等. CRISPR/Cas9技术构建基因敲除细胞系的应用研究进展[J]. 中国细胞生物学学报, 2020, 42(07): 1357-1366.
2. 李婷, 黄波. 基于CRISPR/Cas9技术的基因敲除细胞系建立[J]. 中华检验医学杂志, 2018, 41(02): 146-150.
3. 陈丽梅, 杨芳, 邓华瑜, 等. CRISPR/Cas9技术构建稳定基因敲除细胞株的研究进展[J]. 生物技术通报, 2017, 33(04): 6-12.
以上是毕业论文开题报告，课题毕业论文、任务书、外文翻译、程序设计、图纸设计等资料可联系客服协助查找。
您可能感兴趣的文章
- 铁皮石斛组织培养繁殖技术研究开题报告
- 真菌株系A的死细胞对印染色素活性蓝19（Remazol Brilliant Blue R）的脱色研究开题报告
- Phanerochaete chrysosporiurn与二氧化硅纳米粒子复合体产酶动力学研究开题报告
- 不同纳米氧化铁对植物幼苗的生理生化影响开题报告
- 利用CRISR-Cas9基因编辑技术建立抗病毒蛋白PKR基因敲除细胞系开题报告
- 利用大鼠胰岛β细胞瘤细胞系建立体外糖尿病细胞模型开题报告
- 可得然胶对细菌诱导碳酸钙技术固结砂柱的影响研究开题报告
- 运用微核技术评估常见超加工食品的安全性开题报告
- 农药和环境激素联合对蚕豆根尖微核的诱导研究开题报告
- 几种常见环境污染物致突变性研究开题报告
