1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
importinα3是α-输入蛋白家族中的一员，它广泛存在于真核生物的胞质溶胶中，是核定位信号的受体蛋白，可以与核定位信号结合，并帮助细胞质内的一些蛋白及转录因子等通过核孔复合体（NPC)运输到细胞核内。
研究发现，importin α包含三个保守的结构域, 分别为IBB、ARM和C-端结构域[1]。
其中IBB结构域位于N-端,含有40多个氨基酸残基，主要是与importin β亚基结合。
2. 研究的基本内容和问题
获取黄鳝importinα3 全长，阐述该基因的结构和遗传特性，构建序列分析及系统进化树，检测importinα3基因在黄鳝成体组织分布及早期发育阶段中的表达水平，分析该基因对黄鳝的性逆转中发的作用。
3. 研究的方法与方案
提取黄鳝各个组织及不同发育阶段的总RNA及cDNA第一链的合成：采用Trizol法(Invitrogen)来提取事先采集好的黄鳝血、性腺、小肠、肾、肝、脾、心、脑、肉、皮肤这10个组织及卵裂期、囊胚期、原肠胚期、出膜期、水平游动期、卵黄囊吸收完成期发育阶段的总RNA。
提取之后采用紫外分光光度计判断提取得到的RNA溶液的质量。
然后再采用1%的琼脂糖凝胶电泳进行检测，最后RNA溶液储存在-70C冰箱里以备用。
4. 研究创新点
在黄鳝的生命中会出现性逆转现象，刚出生到产卵前为雌性， 产卵后变为间性，最后进入雄性阶段，因此是研究脊椎动物性别发育和性别决定很好的材料。
有关黄鳝性逆转的决定基因及其在基因水平上的性别调控一直都是国内外研究者所关注的热点。
围绕黄鳝性逆转进行研究的基因主要有：Vasa基因、SRY基因、Dmrt1基因、芳香化酶基因、FTZ-F1基因、sox9基因、核糖体蛋白基因、Igf1r 基因、ＷＴ１基因等、F25基因等。
5. 研究计划与进展
研究计划：2016.9-2016.10 查阅文献，设定并修改实验方案，同时进行实验用鱼的驯养2016.9-2017.2 进行实验2017.2-3实验数据处理2017.3-5 完成实验论文，修改实验论文预期进展：提取出黄鳝血、性腺、小肠、肾、肝、脾、心、脑、肉、皮肤这10个组织及总的RNA，合成cDNA第一链，获得黄鳝importinα3中间保守序列，设计出保守序列的引物，克隆黄鳝importinα3 cDNA末端，连接到pMD-18-T载体上，并送去测序检测，获得黄鳝importinα3基因 cDNA全长序列及编码蛋白序列的分析，构建进化树，分析黄鳝与其他脊椎动物的氨基酸序列相似度，设计实时荧光定量反应引物，测定importinα3基因在黄鳝成体组织分布及卵裂期、囊胚期、原肠胚期、出膜期、水平游动期、卵黄囊吸收完成期这六个时期的样品进行表达分析的表达水平，通过分析不同组织和发育阶段的表达量来分析推测该基因与黄鳝的性逆转之间可能存在的联系，采用实时荧光定量PCR技术检测黄鳝成鱼importinα3基因 mRNA的组织表达特性。
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