1. 研究目的与意义(文献综述包含参考文献)
1.2-FL的研究背景及其意义1.1.2-FL的研究背景人乳寡糖(HMO)是存在于人乳及羊水中的多功能低度聚合糖及其衍生物的统称,是母乳中仅次于水、乳糖和脂肪的第四丰富的物质和第一活性营养物质,具有极高商业价值和潜在的生物医学前景[1-2]。
HMO成分复杂多样,目前已检测出有200多种,包含2-岩藻糖基乳糖、3-岩藻糖基乳糖、乳酰-N-新四糖、乳酰-N-四糖、6-唾液酸乳糖和3-唾液酸乳糖等,而2-岩藻糖基乳糖(2-fucosyllactose,本文简称2-FL)就占其总量的31%,为HMO中含量最多的分泌型母乳成分[1-5],因此对2-FL的合成研究吸引了一大批科研人员的高度关注。
2-FL的合成方法主要分为化学合成法和生物合成法,化学合成法由于反应条件严苛、反应级数冗长等都使得其成本昂贵,并不适用于商业化的扩大生产,至今仍处在千克规模级别[6]。
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2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案
研究或解决的问题:(1)构建一株可通过salvage途径生产2-FL的大肠杆菌菌株(2)研究不同来源的岩藻糖基转移酶及表达载体对菌株生产能力的影响(3)探索在不同条件下产物的产量,通过确定最优发酵条件研究手段检测:(1)在实验室已有基础上通过质粒提取、酶切、PCR获得目的基因并纯化、连接转化等分子生物学手段构建目标菌株(2)选择不同载体表达岩藻糖基转移酶基因,以产量确定最佳表达载体,并将不同来源的岩藻糖基转移酶连接至该载体,进而确定最佳岩藻糖基转移酶通过控制变量法优化发酵条件中接种量、转速、诱导温度、诱导剂浓度,利用高效液相色谱检测产物产量得到最佳发酵条件
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