1. 研究目的与意义
免疫治疗是目前抗肿瘤最常用的方法之一，而免疫逃逸是肿瘤生长的重要机制，其机制可分为源于肿瘤细胞自身的逃逸机制和源于肿瘤微环境中免疫细胞的逃逸机制，而T 细胞在免疫逃逸中起着十分重要的作用。
PD-1/PD-L1是现今备受关注的用来解释肿瘤免疫逃逸的免疫检查点，它是是表达于多种肿瘤表面的共抑制分子，通过下调 T 细胞的抗肿瘤活性参与肿瘤细胞的免疫逃逸，而阻断 PD-1 /PD-L1 途径的治疗已经成为癌症免疫治疗的焦点。
PD-1/PD-L1的机制PD-1在T 细胞受到炎症信号刺激后被诱导产生，并且在以肿瘤为主的外周组织中限制T细胞的功能，由此可限制免疫反应的放大和持续时间，从而避免正常组织的损伤。
2. 文献综述
免疫治疗对肿瘤细胞生长的抑制作用研究杨 可【摘 要】恶性肿瘤是目前癌症患者致死的主要原因之一，而治愈的方法仍然很少，目前免疫治疗是最有前途的抗肿瘤疗法之一，尤其是抗PD-1 /PD-L1药物对肿瘤细胞的生长抑制作用明显，所以本文就PD-1 /PD-L1的机制、对恶性肿瘤的影响以及Ki67等蛋白的表达高低进行文献复习。
【关键词】免疫治疗；PD-1 /PD-L1；恶性肿瘤；Ki67目前肿瘤已经成为威胁人类健康的主要疾病之一，目前认为，免疫逃逸是肿瘤发生、发展的重要机制，其机制可分为源于肿瘤细胞自身的逃逸机制和源于肿瘤微环境中免疫细胞的逃逸机制，T 细胞在免疫逃逸中起着重要的作用。
越来越多的学者用免疫检查点来解释肿瘤的免疫逃逸，备受关注的免疫检查点为PD-1 /PD-L1，其是表达于多种肿瘤表面的共抑制分子，通过下调 T 细胞的抗肿瘤活性参与肿瘤细胞的免疫逃逸，阻断 PD-1 /PD-L1 途径的治疗已经成为癌症免疫治疗的焦点。
3. 设计方案和技术路线
体内的实验方案：1.小鼠肿瘤细胞接种2.随机分组给药3.实验观察和数据收集 4.肿瘤取材 5.肿瘤抑制率分析。
病理（免疫组化IHC）检测方案：1. 样品蜡块及切片制备：样品处理脱水石蜡包埋组织切片2. HE 染色：HE 染色后扫片判断肿瘤区域、肿瘤间质及非肿瘤区域二甲苯10min二甲苯10min100% 乙醇2min100% 乙醇2min90% 乙醇2min80% 乙醇min70% 乙醇2min水洗3次苏木精染色3min水洗3次0.5%盐酸乙醇1-3s水洗3次0.5% 氨水1-3s水洗3次伊红染色30s80% 乙醇1-3s90% 乙醇1-3s100% 乙醇2min100% 乙醇2min二甲苯2min二甲苯5min中性树胶封固3.免疫组化染色：全自动原位杂交染色机染色后，中性树胶封片保存。
4.扫片观察 ：使用全自动高通量扫片机对全片扫描并对病理切片打分。
4. 工作计划
小鼠肿瘤细胞接种已完成，随机分组给药已完成，实验观察和数据记录已完成，肿瘤取材已完成，固定肿瘤已完成，共用时三周，正在进行脱水包埋，之后会进行切片、染色和扫描分析，预计还需三周完成。
已具备条件：体内实验动物房、肿瘤细胞系、阳性和对照药物、相关的病理实验设备，其包括脱水机、包埋机、染色设备、切片机、扫描软件和分析软件。
预期效果：成功建立Pan02小鼠胰腺癌肿瘤模型；合理安排给药；观察肿瘤的生长情况；掌握肿瘤样本的病理学处理和肿瘤相关标记物检测分析；分析anti-PD-L1与增值和凋亡相关性。
5. 难点与创新点
免疫治疗是目前最有前途的抗肿瘤疗法之一，免疫逃逸是肿瘤发生、发展的重要机制，T 细胞在免疫逃逸中起着重要的作用。
越来越多的学者用免疫检查点来解释肿瘤的免疫逃逸，而备受关注的免疫检查点为PD-1 /PD-L1，阻断 PD-1 /PD-L1 途径的治疗已经成为癌症免疫治疗的焦点，了解它的作用机制对临床的治疗具有重要意义肿瘤增殖和凋亡是研究免疫治疗方向，但是在Pan02胰腺癌细胞上面的anti-PD-L1治疗与增殖和凋亡的相关性鲜有报道。
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