消癌解毒方有效成分研究开题报告

消癌解毒方是在国医大师周仲瑛教授癌毒病机理论指导下，在临床实践中形成的治疗肿瘤的有效验方。周老的癌毒病机理论认为：癌毒一旦形成，一方面大量耗伤人体气血津液，一方面导致脏腑气血功能失调，诱生痰、瘀、湿、热等多种病理因素，。周老指出，癌毒郁结是肿瘤的病机关键，正气亏损酿生癌毒是肿瘤的发病基础，治疗应以消癌解毒、益气养阴为主。正是在这一理论指导下，产生了消癌解毒、扶正祛邪的治则，进而配伍形成消癌解毒方，该方由白花蛇舌草、山慈菇、莪术、半枝莲、太子参、麦冬等组成，具有消癌解毒、益气养阴之功效；临床应用于中晚期肝癌等肿瘤取得了较好的疗效。方中以白花蛇舌草、山慈菇为君，清热解毒、消肿散结；莪术活血祛瘀，山慈菇消肿祛炎，二药配伍臣，化痰祛瘀、通络散结、攻毒消癌；佐以太子参、麦冬，益气养阴，扶正祛毒。全方针对肿瘤癌毒郁结、阴伤气耗证的病机，治补兼施临床疗效显著^[1]。目前对于消癌解毒方全方的化学成分研究从未见有文献报道，仅见有组方各单味药的化学成分报道。实验内容及意义主要有：

（1）基于液质连用技术（LC-MS）分析复方配伍前后组分部位及药效干预实验中有关化学成分的变化：

研究内容：利用UPLC-TQ-MS分析法的高灵敏性，可用于定性、定量分析的属性和优势，通过分析正、负离子质谱信息及元素组成，与相关文献数据对照，比较研究复方配伍前后、化学分离过程以及药效实验的关键步骤中组分、部位化学成分以及关键活性成分的变化情况，对文献报道过有潜在或明确抗癌活性的单体，以及含量变化较大的成分，特别是在炎性微环境干预实验中表现较强药效活性的成分，全过程动态测定其含量变化，分析规律，建立关系。

研究目的：液质连用技术在化学定性、定量分析中优势明显，通过建立优化分析条件，定性鉴定化合物结构，测定成分含量变化，为辅助化学成分分离，追踪活性物质以及药效干预实验提供重要参考和支撑。

（2）利用溶剂分离，多种色谱、波谱技术提取精制药效部位和单体化合物，并鉴定结构。

研究内容：遵循复方化学成分组成与极性的差异性，分别采用适宜的提取分离富集法，如溶剂法、沉淀法、大孔树脂吸附、聚酰胺吸附、离子交换等不同分离富集方法，获取不同类型的化学部位或同类分子群；依据成分极性差异，分别用不同极性的溶剂萃取富集，如分别得到石油醚（Pet）部位、二氯甲烷（CH₂Cl₂）部位、乙酸乙酯（EtOAc）部位、甲醇（nBuOH）部位等，结合药效干预实验及液质（LC-MS）检测分析结果，利用现代色谱分离技术，如硅胶薄层色谱、硅胶柱色谱、制备液相、高速逆流色谱（HSCCC）等，分离得到化学类型组合群、极性部位组合群及单体化合物，结合UV、IR、NMR以及MS等波谱分析手段，对单体成分进行纯化分析，鉴定结构。

研究目的：对复方化学成分进行分离分析并鉴定单体结构，得到化学类型组合群、极性部位组合群及有关单体，结合炎性微环境干预实验，追踪、验证与药效相关的化学成分，分析阐明复方干预炎性微环境的药效物质基础。

作为本课题的研究对象。将消癌解毒方组方药物按临床用法，制备水提液，供研究用。遵照其化学成分组成及其结构的差异，分别采用适宜的提取分离富集方法，如溶剂沉淀法、硅胶吸附等不同分离富集方法，获得不同类型的化学成分群。或根据所含成分群极性差异，将上述中药分别用不同极性的溶剂进行萃取，分别得到不同极性溶剂提取部位，如按照极性的大小得到石油醚部位、二氯甲烷部位、乙酸乙酯部位、甲醇部位等不同提取部位浸膏供研究用。

研究方法：

3.1.1部位提取制备，成分分析、分离与结构模拟对接实验

（1）复方及组方中药部位提取制备：选择品种、产地、采收季节、药用部位、加工方法等明确的组方中药（白花蛇舌草、山慈菇、莪术、半枝莲、太子参、麦冬）

（2）基于液质连用技术的化学成分分析：UPLC-TQ-MS分析法结合了液相的高分离以及质谱的高灵敏检测优势，定性：拟采用C18色谱柱(Hanbon LichrospherTM, 4.6mm250 mm,5 μm)，以甲醇-酸溶液为流动相梯度洗脱；质谱使用ESI离子源，正离子与负离子模式下采集数据，通过分析正、负离子质谱信息及元素组成，并与相关文献数据比对，对样品实施定性鉴定；定量：高分辨率质谱具有在无对照品的条件下实施定量分析的优势，拟采用C18色谱柱，乙腈-酸系统溶液为流动相梯度洗脱；样品经电喷雾离子源正负离子化后，通过Waters-Xevo TQ三重四级杆串联质谱仪，采用多反应离子监测化合物，对样品进行含量测定。